تهیه کشت سلولی اولیه زنبور عسل (.Apis mellifera L) به روش های هضم آنزیمی و نشاکاری بافت‌های ریز شده

نوع مقاله: مقاله کامل

نویسندگان

1 عضو هیات علمی موسسه تحقیقات واکسن و سرم سازی رازی

2 عضو هیات علمی سازمان تحقیقات آموزش و ترویج کشاورزی

چکیده

در این تحقیق به منظور تهیه کشت سلولی اولیه زنبور عسل، نمونه‌هایی از مرحله لاروی و شفیرگی زنبور عسل تهیه و بر طبق دستورالعمل‌های استاندارد آماده گردیدند. جهت تهیه کشت اولیه از روش‌های هضم آنزیمی کوتاه مدت (سه مرحله 10 دقیقه‌ای)، هضم آنزیمی طولانی مدت (18 ساعته) و روش نشاکاری بافت‌های ریز شده استفاده گردید. جهت رشد سلول‌های بدست آمده در روش‌های مختلف، از محیط کشت Grac'e غنی شده با سرم جنین گاو (FBS) به مقدار 15% در درجه حرارت
oC 28 استفاده گردید. سلول‌های بدست آمده در روش‌های مختلف، از نظر تعداد و میزان رشد سلول‌های زنده وضعیت مناسبی داشته و بعد از 5-2 هفته به سطح پوششی کامل رسیدند و از آن‌ها چندین پاساژ متوالی تهیه گردید. در روش هضم آنزیمی بهترین نتیجه، از روش تریپسینه کردن طولانی مدت مرحله شفیرگی بدست آمد. نتایج روش نشاکاری بافت‌های ریز شده در هر دو مرحله لاروی و شفیرگی مشابه و آن‌ها نیز از نظر تعداد و میزان رشد سلول‌های زنده وضعیت مناسبی داشتند.

کلیدواژه‌ها


عنوان مقاله [English]

Preparation of honey bee (Apis mellifera L.) primary cell culture by enzymatic disaggregation and planting minced tissues methods

نویسندگان [English]

  • R. Fallahi 1
  • MR., Ghalenoee, 2
1 Member of Scientific Board; Razi Vaccine and Serum Research Institute, Alborz, Iran.
2 Member of Scientific Board; Agricultual Research Education & Extention Organization
چکیده [English]

In this study, in order to preparation of primary cell culture of honey bees, some samples were collected from larval and pupal honey bee and were prepared according to standard guidelines. For preparing of primary culture, the short-time enzymatic disaggregation (three-phase, 10 min), long-time (18 h) and planting minced tissues methods were used. For growth of obtained cells in various methods, the Grac'e medium enriched with fetal bovine serum (FBS) to a value of 15% was used in the temperature 28oC. Cells obtained in various methods, had good status in number and rate of growth of living cells and have reached in full confluency after 2-5 weeks and several successive subcultures were prepared. In enzymatic disaggregation method the best result was obtained from long-time trypsinization of pupa stage. The result of planting minced tissues method in the larval and pupal stages were similar and both were great.

کلیدواژه‌ها [English]

  • Primary Cell Culture
  • honey bee
  • Enzymatic disaggregation
  • Planting minced tissues
1- Bergem, M., Norberg, K. and Aamodt, R. M. (2006) Long-term maintenance of in vitro cultured honeybee (Apis mellifera) embryonic cells, BMC Developmental Biology,6:17.
2- Eide , P.E. (1975) Establishment of a cell line from long-term primary embryonic house fly cell cultures, Journal of Insect Physiology, 21, 8: 1431-1435.
3- Gascuel, J., Masson, C. and Beadle, D. J.(1991) The morphology and ultrastructure of antennal lobe cells from pupal honeybees (Apis mellifera) growing in culture, Tissue and Cell, Volume 23, Issue 4, 547-559.
4- Genersch, E., Gisder, S., Hedtke, K., Hunter, W.B., Mockel, N. and Muller, U.(2013) Standard methods for cell cultures in Apis mellifera research, Journal of Apicultural Research, 52 (1): DOI 10.3896/IBRA.1.52.1.02.
5- Jirasripongpun, K., Parnichnavin, W. and Pamepreeda, U. (2003) Study on primary cell culture preparation from bee larva, Department of Biotechnology, Faculty of Engineering and Industrial Technology, Silpakorn University, Nakornpathom 73170.
6- Kolokol'tsova, T.D, and Tsareva, A.A. ( 1995) Morphological and karyologic analysis of primary and continuous lepidopteran cells, Vopr Virusol , 40(2) :91-95.
7- Kreissl, S. and Bicker, G. (1992) Dissociated neurons of the pupal honeybee brain in cell culture, Journal of Neurocytology, 21, 8: 545-556.
8- Lynn, D.E. (2002) Method for Maintaining Insect Cell Culture, Journal of insect Science, 1-7.
9- Moharrami, M., Modirrousta, H. (2013) Molecular detection of acute bee paralysis virus in Iran, Archives of Razi Institute, Vol. 68, No. 2, 101-104.
10- Murata, Y., Ozaki, M. and Nakamura, T. (2006) Primary
Culture of Gustatory Receptor Neurons from the Blowfly, Phormia regina, Chemical Senses, 31(6):497-504.
11- Tolbert, L. P. and Oland, L.A. (1990) Glial cells form boundaries for developing insect olfactory glomeruli, Experimental Neurology, Volume 109, Issue 1, 19-28.
12- Wolf, K. and Ahne, W. (1982) Advances in Cell Culture, Academic Press, 2: 305-328.
13- Wolf, K. and Ahne, W. (1978) TCA Manual, 2 (4) 741-744.
14- Wolf, K. and Quimby, M. C. (1978) Systematic Management of Animal Cell Lines, TCA Manual, Vol 2, No 1.
15- Yue, C., Schröder, M., Gisder, S. and Genersch, E. (2007) Vertical-transmission routes for deformed wing virus of honeybees (Apis mellifera), Journal of General Virology 88, 2329-2336.