ارزیابی سازگاری بین روش‌های الایزا و شاخص خنثی‌سازی ویروس در تشخیص آنتی‌بادی علیه ویروس بیماری لامپی‌اسکین در گاو

نوع مقاله : مقاله کامل

نویسندگان

1 بخش پاتوبیولوژی، واحد علوم و تحقیقات، دانشگاه آزاد اسلامی، تهران، ایران

2 موسسه تحقیقات واکسن و سرم سازی رازی، سازمان تحقیقات، آموزش و ترویج کشاورزی، کرج، ایران

3 بخش میکروبیولوژی، دانشکده دامپزشکی، دانشگاه شهید چمران اهواز، اهواز، ایران

چکیده

بیماری لامپی اسکین (LSD)، نوعی بیماری به شدت واگیر در گاو و گاومیش است که در مناطق اندمیک خسارات قابل توجهی را به صنعت دامپروری وارد می‌نماید. با وجود اینکه شاخص خنثی‌سازی ویروس (VNI:Virus Neutralization Index) به ‌عنوان استاندارد طلایی در تشخیص سرمی LSD در نظر گرفته می‌شود، اما به‌کارگیری این روش در مطالعات سرواپیدمیولوژی و پایش‌های سرمی، بسیار سخت و زمان‌بر است. از این رو، سیستم‌های الایزا برای تشخیص سرمی بیماری‌های ناشی از کاپری‌پاکس ویروس‌ها ایجاد شده است، اما کمبود اطلاعات در مورد عملکرد و کارایی این تست تشخیصی یکی از عوامل محدود‌کننده استفاده از آن است. در این مطالعه، سازگاری تشخیص سیستم الایزای طراحی شده بر مبنای پروتئین نوترکیب P32 در مقایسه با روش VNI با استفاده از 95 نمونه سرمی شامل 25 نمونه کنترل منفی، 14 نمونه کنترل مثبت و 56 نمونه تهیه شده از گاوهای مشکوک به بیماری لامپی اسکین در مقایسه با روش VNI ارزیابی شد. نتایج نشان داد که تمامی نمونه‌های کنترل منفی در هر دو آزمایش VNI و الایزا هیچگونه تیتر آنتی‌بادی ضد ویروس لامپی اسکین نداشتند. در آزمایش VNI تیتر همه‌ی 14 (%100)  نمونه کنترل مثبت برابر یا بیشتر از 5/1 بود و مثبت ارزیابی شدند، اما آزمایش الایزا، 13 نمونه (%93) را مثبت اعلام نمود. از بین 56 نمونه اخذ شده از دام‌های مشکوک به بیماری لامپی اسکین، 16 نمونه (%29) بوسیله آزمایش VNI مثبت ارزیابی شد، در حالی‌که در آزمایش الایزا تعداد 13 نمونه (23%) مثبت تشخیص داده شد. در مجموع 95 نمونه‌ی سرمی، درصد تشخیص نمونه‌های مثبت و یا منفی با دو روش تشخیصی از نظر آماری اختلاف معنی‌داری نداشتند (05/0<P) و سازگاری بین دو روش که با شاخص کاپا اندازه‌گیری شد، 71/0 بود. این نتایج نشان از سازگاری و عملکرد قابل قبول سیستم الایزای طراحی شده بر پایه پروتئین نوترکیب P32 در تشخیص آنتی بادی علیه ویروس LSD دارد.  

کلیدواژه‌ها


عنوان مقاله [English]

Evaluation of agreement between ELISA and virus neutralization index methods in the antibody detection against lumpy skin disease virus in cattle

نویسندگان [English]

  • M. H Ebrahimi-jam 1
  • H. Keyvanfar 1
  • H. R. Varshoiee 2
  • M. R Seyfi Abad Shapouri 3
  • M. Lotfi 2
1 Department of Pathobiology, Science and Research Branch, Islamic Azad University, Tehran, Iran
2 Razi Vaccine and Serum Research Institute, Agricultural Research, Education and Extension Organization (AREEO), Karaj, Iran
3 Department of Microbiology Faculty of Veterinary medicine of Shahid Chamran University of Ahvaz, Ahvaz, Iran
چکیده [English]

Lumpy skin disease (LSD) is a highly contagious disease of cattle and buffaloes that cause considerable economic losses to the livestock industry in endemic regions. Although the virus neutralization index (VNI) is the gold standard test for the detection of LSD antibodies, the use of this test in seroepidemiology studies and serosurveillance is laborious and time-consuming. Accordingly, for serodiagnosis of capripox diseases, ELISA assay has been developed, but the lack of information about its performance and efficiency is one of the limiting factors in the use of this test in seroepidemiological studies. In this study, the diagnosis agreement between a recently developed ELISA based on P32 recombinant protein and the VNI method, as a gold standard for serological diagnosis of Capripox virus, was evaluated using 95 sera samples including 25 negative control, 14 positive control, and 56 suspected cattle sera. Result showed that all the negative control sera assessed by VNI and ELISA had no antibody titers against LSD. All the 14 (100%) positive control sera had VNI values ≥1.5 and were considered as the positive sera; however, by ELISA method, 13 samples (93%) were diagnosed as the positive. Among the 56 samples collected from LSD-suspected cattle, 16 samples (29%) were detected as the positive by VNI, whereas 13 samples (23%) were detected as the positive sera by ELISA method. There was no statistically significant difference between the percentages of negative or positive samples assessed by ELISA or VNI method (P>0.05), associated with the Kappa index value of 0.71 showing the substantial agreement. These findings indicating an acceptable agreement and performance of the developed ELISA system based on P32 recombinant protein in comparison to VNI method for diagnosing antibody against LSD virus in cattle. 

کلیدواژه‌ها [English]

  • ELISA
  • neutralization index
  • Kappa index
  • Capripox
  • Lumpy skin
1- Al-Salihi. 2014. Lumpy skin disease: Review of literature. Mirror of research in veterinary sciences animals 3: 6-23.
2- Awad, W. S., A. K. Ibrahim, K. Mahran, K. M. Fararh and M. I. A. Moniem. 2010. Evaluation of different diagnostic methods for diagnosis of lumpy skin disease in cows. Tropical animal health production 42: 777-783.
3- Babiuk, S., D. Wallace, S. Smith, T. Bowden, B. Dalman, G. Parkyn, J. Copps and D. Boyle. 2009. Detection of antibodies against capripoxviruses using an inactivated sheeppox virus ELISA. Transboundary emerging Disease 56: 132-141.
4- Bhanot, V., V. Balamurugan, V. Bhanuprakash, G. Venkatesan, A. Sen, V. Yadav, R. Yogisharadhya and R. Singh. 2009. Expression of P32 protein of goatpox virus in Pichia pastoris and its potential use as a diagnostic antigen in ELISA. Journal of virological methods 162: 251-257.
5- Bowden, T. R., B. E. Coupar, S. L. Babiuk, J. R. White, V. Boyd, C. J. Duch, B. J. Shiell, N. Ueda, G. R. Parkyn and J. S. Copps. 2009. Detection of antibodies specific for sheeppox and goatpox viruses using recombinant capripoxvirus antigens in an indirect enzyme-linked immunosorbent assay. Journal of virological methods 161: 19-29.
6- Chand, P., R. Kitching and D. Black. 1994. Western blot analysis of virus-specific antibody responses for capripox and contagious pustular dermatitis viral infections in sheep. Epidemiology Infection 113: 377-385.
7- Davies, F. 1991. Lumpy skin disease, an African capripox virus disease of cattle. British Veterinary Journal 147: 489-503.
8- Davies, F., H. Krauss, J. Lund and M. Taylor. 1971. The laboratory diagnosis of lumpy skin disease. Research in Veterinary Science 12: 123-128.
9- Davies, F. and C. Otema. 1981. Relationships of capripox viruses found in Kenya with two Middle Eastern strains and some orthopox viruses. Research in veterinary science 31: 253-255.
10- Diallo, A. and G. J. Viljoen. Section. 2007. Genus capripoxvirus.  167-181.  Poxviruses. Springer; 
11- Ebrahimi-Jam, M., H. Keyvanfar, H. Varshovi, M. Seyfi Abad Shapoori and M. Lotfi. 2020. Development and Evaluation of an Indirect Capripox Virus ELISA Based on Truncated P32 Protein expressed in E. coli. Archives of Razi Institute.
12- Gari, G., F. Biteau-Coroller, C. LeGoff, P. Caufour and F. Roger. 2008. Evaluation of indirect fluorescent antibody test (IFAT) for the diagnosis and screening of lumpy skin disease using Bayesian method. Veterinary microbiology 129: 269-280.
13- Haegeman, A., A. De Vleeschauwer, I. De Leeuw, D. Vidanović, M. Šekler, T. Petrović, C. Demarez, D. Lefebvre and K. De Clercq. 2019. Overview of diagnostic tools for Capripox virus infections. Preventive veterinary medicine: 104704.
14- King, A., M. Adams, E. Carstens and E. Lefkowitz. 2012. International Committee on Taxonomy of Viruses: Virus taxonomy: classification and nomenclature of viruses: ninth report of the International Committee on Taxonomy of Viruses. Academic Press.
15- Kitching, R., J. Hammond and D. Black. 1986. Studies on the major common precipitating antigen of capripoxvirus. Journal of general virology 67: 139-148.
16- Madhavan, A., G. Venkatesan and A. Kumar. 2016. Capripoxviruses of small ruminants: current updates and future perspectives. Asian Journal of Animal and Veterinary Advances 11: 757-770.
17- OIE. 2017. Manual of Diagnostic Tests and Vaccines for Terrestrial Animals,. Paris, OIE.
18- Sameea Yousefi, P., K. Mardani, B. Dalir‐Naghadeh and G. Jalilzadeh‐Amin. 2017. Epidemiological study of lumpy skin disease outbreaks in North‐western Iran. Transboundary emerging diseases 64: 1782-1789.
19- Samojlović, M., V. Polaček, V. Gurjanov, D. Lupulović, G. Lazić, T. Petrović and S. Lazić. 2019. Detection of antibodies against Lumpy skin disease virus by Virus neutralization test and ELISA methods. Acta Veterinaria 69: 47-60.
20- Tulman, E., C. Afonso, Z. Lu, L. Zsak, G. Kutish and D. Rock. 2001. Genome of lumpy skin disease virus. Journal of virology 75: 7122-7130.
21- Tulman, E., C. Afonso, Z. Lu, L. Zsak, J.-H. Sur, N. Sandybaev, U. Kerembekova, V. Zaitsev, G. Kutish and D. Rock. 2002. The genomes of sheeppox and goatpox viruses. Journal of virology 76: 6054-6061.
22- Tuppurainen, E. and C. Oura. 2012. lumpy skin disease: an emerging threat to Europe, the Middle East and Asia. Transboundary emerging diseases 59: 40-48.
23- Tuppurainen, E., E. H. Venter, J. Shisler, G. Gari, G. Mekonnen, N. Juleff, N. Lyons, K. De Clercq, C. Upton and T. Bowden. 2017. Capripoxvirus diseases: current status and opportunities for control. Transboundary emerging diseases 64: 729-745.
24- Tuppurainen, E. S., E. Venter and J. Coetzer. 2005. The detection of lumpy skin disease virus in samples of experimentally infected cattle using different diagnostic techniques. Onderstepoort Journal of Veterinary Research 72: 153-164.
25- Venkatesan, G., M. K. Teli, M. Sankar, A. Kumar, M. Dashprakash, S. Arya, A. Madhavan, M. A. Ramakrisnan and A. B. Pandey. 2018. Expression and evaluation of recombinant P32 protein based ELISA for sero-diagnostic potential of capripox in sheep and goats. Molecular cellular probes 37: 48-54.