جداسازی، شناسایی و تعیین هویت مولکولی گونه های آیمریا در گوساله ها

نوع مقاله : مقاله کامل

نویسندگان

آزمایشگاه تک‌یاخته شناسی، بخش تحقیقات بیماری‌های انگلی دام، موسسه تحقیقات واکسن و سرم‌سازی رازی کرج، سازمان تحقیقات، آموزش و ترویج کشاورزی کرج، ایران

چکیده

تشخیص گونه‌های آیمریا براساس خصوصیات مورفولوژی بسیار محدود بوده و استفاده از روش‌های مولکولی این محدودیت‌ها را برطرف می‌سازد. نمونه‌های مدفوع گوساله‌ها از استان البرز و شهر شاهرود جمع‌آوری شده و پس از تغلیظ به روش شیتر به طریق میکروسکوپی مورد ارزیابی قرار گرفتند. نمونه‌های مثبت با استفاده از روش پی‌سی‌آر و با به کارگیری پرایمرهای اختصاصی گونه از نظر مولکولی نیز ارزیابی شدند. با استفاده از روش فلوتاسیون شیتر و گسترش مستقیم در 5 نمونه (10%) از 50 نمونه مدفوع جمع‌آوری شده از شهر شاهرود و 10 نمونه (09/9 %) از 110 نمونه مدفوع جمع‌آوری شده از استان البرز تک‌یاخته‎جنس آیمریا تشخیص داده شد.در مجموع در میان 160 راس دام مورد آزمایش 15 مورد (37/9 %) با استفاده از گسترش مستقیم و تغلیظ فلوتاسیون مثبت تشخیص داده شدند. از آنجائی‌که تمام موارد مثبت مربوط به نمونه‌های غیر اسهالی بود، ارتباط معنی داری بین وضعیت اسهال و حضور این انگل مشاهده نگردید (05/0<P). از نظر توزیع فصلی تفاوتی در میزان موارد اسهالی و موارد مثبت انگلی مشاهده نشد. با به کارگیری پرایمرهای اختصاصی گونه‌های آیمریا در گاو و استفاده از روش پی‌سی‌آر بر روی نمونه‌های مثبت حاصل از روش تغلیظ با فلوتاسیون آب شکر تنها 3 گونه آیمریا زورنئی، آیمریا بوویس و آیمریا اوبورننسیس جداسازی گردید.

کلیدواژه‌ها

عنوان مقاله [English]

Isolation, Characterization and molecular identification of Eimeria spp. in young calves

نویسندگان [English]

  • V. Nasiri
  • H. Paykari
  • F. Jameie
  • Gh. Karimi
Protozoology laboratory , Parasitology department, Razi Vaccine and Serum Research Institute, Agricultural Research, Education and Extension Organization (AREEO), Karaj, Alborz, Iran
چکیده [English]

In this study, the ITS-1 region of ribosomal RNA genes of six bovine Eimeria species: E. alabamensis, E. auburnensis, E. bovis, E. cylindrica, E. ellipsoidalis and E. zuernii analysed by PCR and the results of molecular methods analysed to find any relationship between presence of parasites and diarretic status. Studies were conducted in calves aged less than 3 months for a period of 2 years. During the study period, 160 dung samples were collected from neonatal calves and examined first microscopically and then by molecular techniques. Stools were analyzed for the presence of Eimeria Spp. oocysts by Sheather's Sugar Flotation Solution method. DNA was extracted and PCR were done to identify six cattle-adapted specie (E.alabamensis, E.auburnensis, E.bovis, E.cylindrica, E.ellipsoidalis and E.zuernii). Eimeria spp. infection was detected in 15 (9.37%) of 160 calves without a history of diarrhea infection and pathogenic Eimeria spp. was asymptomatic in all animals that was not positively related to the diarrheic status of the calves (P>0.05). According to microscopic analsis 6 species (E.alabamensis, E.auburnensis, E.bovis, E.canadensis, E.ellipsoidalis, and E. zuernii) identified and with molecular technique 3 species (E.auburnensis, E.bovis, E. zuernii) were detected. Different risk factors were considered to affect the rate of infection of calves with this protozoan parasite. For controlling disease, Immune status of the calves should be improved by providing sufficient amount of colostrum within the first 24 hours after birth and good hygiene as well as reducing and monitoring stress levels caused by weaning, a change in feed and overcrowding. 

کلیدواژه‌ها [English]

  • Eimeria Spp
  • diarrhea
  • calves

مراجع

1. Ali, S. R., & Latif, B. M. A. 1989. Bovine coccidiosis in Baghdad area-Iraq. Magallat Buhut′ Ulum Al-Hayat, 20(3), 483–488.
2. Arslan, M. Ö., & Tüzer, E. 1998. Prevalence of bovine eimeridosis in Thracia, Turkey. Turkish Journal of Veterinary and Animal Sciences, 22(2), 161–164.
3. Boom, R., Sol, C. J., Salimans, M. M., Jansen, C. L., Wertheim-van Dillen, P. M., & Van der Noordaa, J. 1990. Rapid and simple method for purification of nucleic acids. Journal of Clinical Microbiology, 28(3), 495–503.
4. Das, M., Deka, D. K., Sarmah, P. C., Islam, S., & Sarma, S. 2015. Diversity of eimeria spp. In dairy cattle of guwahati, assam, india. Veterinary World, 8(8), 941–945. https://doi.org/10.14202/vetworld.2015.941-945
5. Eckert J., Taylor M., Catchpole J., Licois D., Coudert P., Bucklar H. 1995: Morphological characteristics of oocyts. In: J. Eckert, R. Braun, M.W. Shirley and P. Coudert (Eds.), Guidelines on techniques in coccidiosis research. European Commission, Directorate-General XII, Science, Research and Development Environment Research Programme, pp. 103–119.
6. Fayer, R., & Xiao, L. 2007. Cryptosporidium and cryptosporidiosis. CRC press.
7. Heidari, H., Sadeghi-Dehkordi, Z., Moayedi, R., & Gharekhani, J. (2014). Occurrence and diversity of Eimeria species in cattle in Hamedan province, Iran. Veterinarni Medicina, 59(6), 271–275.
8. Kasim, A. A., & Al-Shawa, Y. R. 1985. Prevalence of Eimeria in faeces of cattle in Saudi Arabia. Veterinary Parasitology, 17(2), 95–99.
9. Kawahara, F. 2009. Parasitological analyses of Ei m e ria infections in domestic animals and the development of molecular methods for species discrimination. Hokkaido University.
10. Kawahara, F., Zhang, G., Mingala, C. N., Tamura, Y., Koiwa, M., Onuma, M., & Nunoya, T. 2010. Genetic analysis and development of species-specific PCR assays based on ITS-1 region of rRNA in bovine Eimeria parasites. Veterinary Parasitology, 174(1–2), 49–57. https://doi.org/10.1016/j.vetpar.2010.08.001
11. Lassen, B. 2009. Diagnosis, Epidemiology and Control of Bovine Coccidioses in Estonia. https://doi.org/ISBN: 978-9949-426-73-7
12. Levine, N. D., & Ivens, V. 1967. The sporulated oocysts of Eimeria illinoisensis n. sp. and of other species of Eimeria of the ox. The Journal of Protozoology, 14(2), 351.
13. Li, G., Xiao, S., Zhou, R., Li, W., & Wadeh, H. 2007. Molecular characterization of Cyclospora-like organism from dairy cattle. Parasitology Research, 100(5), 955.
14. McKenna, P. B. 1972. The identity and prevalence of coccidia species in sheep and cattle in New Zealand. New Zealand Veterinary Journal, 20(12), 225–228.
15. Shirley, M. W., & Coudert, P. 1995. Guidelines on techniques in coccidiosis research. Eimeria and Isospora.
16. Shojaei, S.Sh.R, Shaghayegh, A, Ahmadi, A. 2011. A Study on the prevalence of Bovine Coccidiosis in some Dairy Farms at Alborz Province(Iran). J.Vet.Clin.Res, 2(1), 25–31.
17. Svensson, C., Uggla, A., & Pehrson, B. 1994. Eimeria alabamensis infection as a cause of diarrhoea in calves at pasture. Veterinary Parasitology, 53(1–2), 33–43.
18. Yakhchali, M. 2010. The prevalence and intensity of Eimeria spp. infection in sheep of Malayer suburb, Iran, 65(1), 27–32.
19. Yakhchali, M., & , Rahmati, R. . 2015. Eimeria infection in dairy cattle of industrial farms in kangavar sub- urban of Kermanshah province, Iran. Journal of Veterinary Research, 70(3), 263–271.
20. Yakhchali, M., & Gholami, E. 2008. Prevalence of Eimeria and Cryptosporidium spp in cattle of Sanandaj city (Kurdistan province), Iran. Pajouhesh and Sazandegi, 87, 81–87.
21. Yakhchali, M., & Zareei, M. 2008. A survey of frequency and diversity of Eimeria species in cattle and buffalo in Tabriz region. Scientific-research Iranian Veterinary Journal, 4(1(18)), 94–102.

فایل ها

سابقه مقاله

  • تاریخ دریافت: 24 تیر 1398
  • تاریخ بازنگری: 05 مهر 1398
  • تاریخ پذیرش: 06 مهر 1398

هم رسانی

ارجاع به این مقاله

آمار