بررسی آلودگی احتمالی سوبستراهای سلولی مورد استفاده در تولید فرآورده های بیولوژیک در موسسه رازی به نانوباکتری‌ها به روش مولکولی

نوع مقاله: مقاله کامل

نویسندگان

1 گروه میکروبیولوژی، دانشگاه آزاد اسلامی، کرج، ایران

2 مدیریت کنترل کیفی فرآورده های بیولوژیک موسسه تحقیقات واکسن و سرم سازی رازی، سازمان تحقیقات، آموزش و ترویج کشاورزی، کرج، ایران

3 استادیار گروه میکروبیولوژی، دانشگاه آزاد اسلامی، کرج، ایران

چکیده

تولید واکسن‌های ویروسی و فرآورده‌های دارویی بر پایه سلولی، یک فرایند پیچیده است که در آن از مواد بیولوژیک متفاوتی (انواع سوبسترای سلولی مثل: تخم‌ مرغ جنین‌دار، سلول‌های پرایمری و لاین، مواد خام و افزودنی‌های محیط کشت با منشاء حیوانی و ویروس بذر) استفاده می‌گردد، که مراحل فوق را بالقوه نسبت به آلودگی‌ با عوامل ناخواسته آسیب‌پذیر می‌کند. Nanobacteria همچون سایر عوامل ناخواسته می‌تواند از طریق مواد اولیه با منشاء دامی سبب آلودگی این قبیل فرآورده‌ها شود. در این تحقیق با راه‌اندازی آزمایش PCR جهت ردیابی اختصاصی Nanobacteria نسبت به ارزیابی میزان آلودگی احتمالی سلول‌های موجود بخصوص سلول‌های لاین و دیپلوئید مورد استفاده در تولید واکسن در موسسه رازی اقدام بعمل آمد. بدین منظور سلول‌های مورد مصرف در بخش‌های تحقیق، تولید و کنترل کیفی فراورده‌های بیولوژیک جمع‌آوری و پس از استخراج DNA، آزمایش PCR جهت تکثیر ناحیه 16S rRNA Nanobacteria احتمالی، بر روی آن‌ها انجام شد. از باکتری Bartonella henselae بعنوان کنترل مثبت استفاده شد. در بررسی محصول PCR پس از الکتروفورز همان‌طور که انتظار می‌رفت، نمونه کنترل مثبت در واکنش PCR قطعه 558 جفت بازی را تکثیر کرد که این امر بیانگر صحت انجام واکنش‌ها بود. در ارزیابی آلودگی احتمالی سلول‌های فوق، کلیه سلول‌ها عاری از آلودگی به Nanobacteria بودند. بدلیل عدم اطلاعات از میزان شیوع Nanobacteria در جمعیت دامی، ارزیابی مقدار ریسک مقدور نیست. لذا توصیه می‌شود مطالعات جامعی در این خصوص صورت پذیرد.

کلیدواژه‌ها

موضوعات


عنوان مقاله [English]

Investigation of Nanobacteria contamination in cell substrate used in biological productions in Razi Institute by molecular method

نویسندگان [English]

  • Nahid Asadi 1
  • Mohsen Lotfi 2
  • Naser Harzandi 3
1 Department of Microbiology, Karaj Branch, Islamic Azad University, Karaj, Iran
2 Department of Quality Control, Razi Vaccine and Serum Research Institute, Agricultural Research, Education, and Extension Organization, Karaj, Iran
3 Department of Microbiology, Karaj Branch, Islamic Azad University, Karaj, Iran
چکیده [English]

Production of viral vaccines and also drugs products which are derive from cells produced in various biological materials, like cell substrates eg: fertile eggs, primary cells, cell lines, raw materials and additives used in culture media which have animal origin and seed virus which is used for culture have a complicated process. The above processes are naturally vulnerable for contamination to adventitious agents. The Nanobacteria like other adventitious agents can cause contamination through primary materials with animal origin for such a product. The aim of this study was to design a program for PCR which is specific for detection of probable presence of Nanobacteria in cells, especially in cell lines and diploids which is used in vaccine production in Razi institute. For this purpose the cells which are used in following departments, research, production and Quality control for biological products were collected and DNA was extracted for PCR expression on 16S rRNA area from Nanobacteria. Bartonella henselae was used as a positive control. As it was expected the results of PCR products after electrophoresis were positive for above organism and at the area of 558 bp replicated which it confirms the correctness of our experiment. The cells from all departments were negative for Nanobacteria, however for not having enough information for spread and risk evaluation of Nanobacteria in cattle population there are a great need for further investigation. 

کلیدواژه‌ها [English]

  • Nanobacterium sanguineum
  • Cell culture
  • vaccine
  • adventitious agents
  • PCR
1. Aho, K and E. O. Kajander. 2003. Pitfalls in Detection of Novel Nanoorganisms. Journal of clinical microbology 41(7): 0095-1137.
2. Ansari H., A. Akhavan Sepahi and M. Akhavan Sepahi. 2017. Different Approaches to Detect “Nanobacteria” in Patients with Kidney Stones: an Infectious Cause or a Subset of Life. Endourology and stone disease journal 14 (5):5001-5007.
3. Barr S. C., R. A. Linke, D. Janssen, C. L. Guard, M.C. Smith, C. S. Daugherty and J. M. Scarlett. 2003. Detection of biofilm formation and Nanobacteria under long-term cell culture conditions in serum samples of cattle, goats, cats, and dogs. American journal of veterinary research 64(2): 176-182.
4. Ciftcioglu, N and E. O. Kajander. 1998. Interaction of Nanobacteria with cultured mammalian cells. Pathophysiology journal 4(4):259-270.
5. Drancourt, M., V. Jacomo, H. Lepidi, E. Lechevallier, V. Grisoni, C. Coulange and E. Ragni. 2003. Attempted isolation of Nanobacterium sp. Microorganisms from upper urinary tract stones. Journal of clinical microbiology 41:368–372.
6. Furtak, V. A., A. Dabrazhynetskaya, D. V. Volokhov and V. Chizhikov. 2015. Use of tangential flow filtration for improving detection of viral adventitious agents in cell substrates. Biologicals journal 43(1):23-30.
7. Habibipour, R., G. R. Zarrini and S.H. Yarizadeh. 2017. Isolation and Characterization of Hyperthermophilic Nanobacteria from a Hot Spring in Ardabil, Iran. Medical laboratory journal 11(3):20-24.
8. Izadi, A and E. Moslemi. 2014. A Survey on the Presence of Calcifying Nanoparticles in Renal Stones, Gallbladder Stones and Atherosclerosis Plaque. Journal of kerman university of medical sciences 21(4): 302-312. (In Farsi).
9. Jerman, I. 2017. What Nanobacteria and Nanovesicles May Tell Us about the Origin of Life. Open access library journal 4: e3348.
10. Kolahi, J., M. Shahmoradi and M. Sadreshkevary. 2018. Nanobacteria in clouds can spread oral pathologic calcifications around the world. Dental hypotheses journal 3(4):138-141.
11. Lu, H., Y. N. Guo, S. N. Liu, H. Zhu and D. C. Zhang. 2012. Isolation, cultivation and identification of Nanobacteria from placental calcification. The Journal of Maternal-Fetal and Neonatal Medicine 25(11): 2182–2185.
12. Lwin, K. M. 2012. Nanobacterium sanguineum In Pathological Calcifications. first printing. FAME Publishing House, Hlaing Tharyar city of Industry Yangon Myanmar.
13. Martel, J., H. H. Peng, D. Young, C. Y. Wu and J. D. Young. 2014. Of Nanobacteria, nanoparticles, biofilms and their role in health and disease: facts, fancy and future. Future Medicine Ltd 9(4), 483–499.
14. Miller, V. M., G. Rodgers and J. A. Charlesworth. 2004. Evidence of Nanobacterial-like structures in calcified human arteries and cardiac valves. American Journal of Physiology-Heart and Circulatory Physiology 287(3): 1115–1124.
15. Petricciani, J., R. Sheets, E. Griffiths and I. Knezevic. 2014. Adventitious agents in viral vaccines: Lessons learned from 4 case studies. Biologicals journal 42(5):223-36.
16. Sardarabadi, H., M. Mashreghi, K. h. Jamialahmadi and T. Dianat. 2014. Resistance of Nanobacteria isolated from urinary and kidney stones to broad-spectrum antibiotics. Iranian journal of microbiology 6(4):230-233.
17. Shojaeian, A., M. Rostamian, J. Noroozi and P. Pakzad. 2016. The Identification of Chemical and Bacterial Composition and Determination of FimH Gene Frequency of Kidney Stones of Iranian Patients. Zahedan journal of research in medical sciences 18(6):e7363.
18. WHO. 2013. Recommendations for the evaluation of animal cell cultures as substrates for the manufacture of biological medicinal products and for the characterization of cell banks. Technical Report Series, No. 978. available online at: http://www.who.int/biologicals/Cell_Substrates_clean_version_18_April.pdf
19. Yaghobee, S., M. Bayani, N. Samiei and N. Jahedmanesh. 2015. Review; What are the Nanobacteria. Biotechnology & Biotechnological Equipment 29 (5): 826–833.