شناسایی Mycobacterium avium subspecies paratuberculosis (Map) با استفاده از مارکرهای ژنتیکیF57, IS1311, HspX, Map02, ISMav2, Locus 255 ،مکملی بر مارکر شناخته شده IS900.

مقالات آماده انتشار

نوع مقاله : مقاله کامل

نویسندگان

1 دپارتمان میکروب شناسی، دانشکده علوم پایه، واحد قم، دانشگاه آزاد اسلامی، قم، ایران.

2 موسسه تحقیقات واکسن و سرم سازی رازی سازمان تحقیقات، ترویج و آموزش کشاورزی بخش میکروب شناسی

3 دپارتمان میکروب شناسی، دانشکده علوم پایه، شعبه قم، قم، ایران کدپستی: 3749113191

4 موسسه تحقیقات واکسن و سرم سازی رازی سازمان تحقیقات، ترویج و آموزش کشاورزی بخش واکسن های دامپزشکی باکتریایی هوازی

چکیده

مقدمه مایکوباکتریوم ایویوم زیرگونه پاراتوبرکولوزیس Mycobacterium avium subspecies paratuberculosis (Map)عامل ایجاد بیماری یون (پارتوبرکولوزیس) در نشخوارکنندگان می باشد. این باکتری دارای کند ترین سرعت رشد در میان مایکوباکتریوم های قابل رشد و کشت نمونه های مشکوک به آن 12 هفته و یا حتی بیشتر پیش از آنکه پرگنه مشهودی ایجاد نماید، بطول می انجامد. در حال حاضر IS900 شناخته شده ترین مارکر ژنتیکی در پروتکل های تشخیصی Map با پایه PCR می باشد. بواسطه شناسایی عناصر ژنتیکی شبیه IS900 در ژنوم مایکوباکتریوم های دیگر، اختصاصیت این مارکر زیر سوال قرار گرفته است
هدف در مطالعه حاضر کاربرد این مارکر همراه با شش مارکر دیگر اختصاصی شامل F57, IS1311, HspX, Map02, ISMav2 and Locus 255 شرح داده شده است.
روش کار واکنش های PCR بصورت انفرادی و به روش متعارف اجرا گردیدند. تمهیدات لازم برای بهینه سازی شرایط دما و اجزاء واکنش به نحوی انجام پذیرفت که واکنش های همه مارکرها توسط یک پروتکل قابل اجرا باشند. این رویه بر روی 30 جدایه بومی Map جمع آوری شده از گاو (24 مورد)، بز (2 مورد) و گوسفند ( 4 مورد) در استان های اصفهان، البرز، تهران، زنجان، فارس و قزوین اجرا گردید.
یافته ها اجرای این روش در تمام واکنش های PCR بر روی همه جدایه ها و همچنین سویه آزمایشگاهی Map 316f با موفقیت همراه بود و محصولات مورد انتظار در تکثیر بطول 560 ، 704، 608، 211، 278 ، 507 و 404 زوج باز بترتیب در مورد مارکرهای IS900، F57، IS1311، HspX، Map02، ISMav2 و Locus 255 تولید شدند.
نتیجه گیری در شرایط ایران که مارکر ژنتیکی IS900 همچنان به عنوان ستون فقرات در روش های مولکولی تشخیص Map بکار گرفته می شود، استفاده همزمان آن با هر یک از شش مارکر ژنتیکی شرح داده شده در این مطالعه به توانایی آزمایشگاه در تشخیص صحیح Map خواهد افزود.

کلیدواژه‌ها

موضوعات

عنوان مقاله [English]

PCR detection of Mycobacterium avium subspecies paratuberculosis by the F57, IS1311, hspx, Map02, ISmav2 and Locus 255 markers, a supplement to the conventional IS900 element

نویسندگان [English]

  • Reza Najafpour 1
  • Mohammad Reza Zolfaghari 1
  • Nader Mosavari 2
  • Razieh Nazari 3
  • Keyvan Tadayon 4
1 Department of Microbiology, Faculty of Basic Science, Qom Branch, Islamic Azad University, Qom, 3749113191 Iran
2 Razi Vaccine and Serum Research Institute, Agricultural Research, Education and Extension Organization (AREEO), Microbiology Department
3 Department of Microbiology, Faculty of Basic Science, Qom Branch, Islamic Azad University, Qom, 3749113191
4 Razi Vaccine and Serum Research Institute, Agricultural Research, Education and Extension Organization (AREEO), Veterinary Aerobic Bacteria Vaccines Department
چکیده [English]

Introduction Mycobacterium avium subsp. paratuberculosis (Map) causes Johne’s disease (paratuberculosis) in ruminants. Map represents the slowest growth rate of the cultivable mycobacteria as culture of Map-suspected specimens can take 16 weeks or even more before its colonies are visible. Currently, the IS900 is the most frequently-used genetic marker in PCR-based diagnostic protocols of Map. Specificity of this however, has come into question as IS900-like elements have been reported in genome of other mycobacteria.
Aims Here application of IS900 along with six further genetic loci specific to Map including F57, IS1311, HspX, Map02, ISMav2 and Locus 255 has been described.
Methods PCRs, conducted in singleplex format were of conventional type. Optimization measures on thermal and MgCl2-concentration were employed in a way that a single optimized thermal protocol was applicable for all the markers. This strategy was applied on 30 Iranian bovine (N=24), caprine (N=2) and ovine (N=4) Map isolates representing Alborz, Fars, Isfahan, Zanjan, Qazvin and Tehran provinces.
Results Amplification in all PCR reactions on the whole panels of 30 isolates along with the Map laboratory strain of 316f was successful as the expected PCR products of 560, 704, 608, 211, 278, 507, and 404 bp related to the IS900, F57, IS1311, HspX, Map02, ISMav2 and Locus 255 markers respectively, were produced.
Conclusion We assume in the Iranian environment where IS900 remains the backbone in molecular diagnosis of Map, pairing any of the six extra markers described here with the IS900 element, will improve the capability of the laboratory setting in accurate diagnosis of Map.

کلیدواژه‌ها [English]

  • Map
  • PCR
  • amplification
تحقیقات دامپزشکی و فرآورده‌های بیولوژیک

مقالات آماده انتشار، اصلاح شده برای چاپ
انتشار آنلاین از تاریخ 02 دی 1403

فایل ها

سابقه مقاله

  • تاریخ دریافت: 08 مهر 1403
  • تاریخ بازنگری: 23 آذر 1403
  • تاریخ پذیرش: 02 دی 1403

هم رسانی

ارجاع به این مقاله

آمار