مطالعه کاهش حدت نئوسپورا کنینوم بعد از پاساژهای متوالی روی رده سلولی J774

نوع مقاله : مقاله کامل

نویسندگان

1 گروه بیوشیمی دانشگاه آزاد اسلامی واحد شیراز

2 موسسه تحقیقات سرم و واکسن سازی رازی شعبه شیراز، سازمان تحقیقات، آموزش و ترویج کشاورزی

چکیده

هدف از این مطالعه، ایجاد تخفیف حدت در تک یاخته‌ی نئوسپورا کانینوم (Neospora caninum) از طریق پاساژ متوالی روی رده سلولی J774 و ارزیابی میزان حدت آن در موش BALB/c بود. ایزوله شماره یک نئوسپورا کانینوم بر روی رده سلولی J774، 90 مرتبه پاساژ داده شد تا سوش تخفیف حدت‌یافته تولید شود؛ سپس 35 سر موش BALB/c ماده با متوسط سن شش تا هشت هفته به صورت تصادفی به هفت گروه پنج‌تایی تقسیم شدند. به گروه اول به عنوان شاهد فقط محیط کشت، به گروه دوم و سوم و چهارم سوش حاد Nc1 با دوزهای 106×5، 106×10 و106×20 و به گروه پنجم، ششم و هفتم سوش تخفیف حدت یافته Nc1 با دوزهای106×5، 106×10 و106×20 به صورت زیر جلدی تزریق شد. تمامی موش‌ها به صورت روزانه بررسی و نشانه‌های بیماری و تلفات احتمالی موش‌ها ثبت گردید. در این مطالعه ایمنی سلولی با آزمایش جلدی و ایمنی هومورال با آزمایش الایزا بررسی شد. نتایج این مطالعه نشان داد موش‌هایی که سوش تخفیف حدت یافته را دریافت کرده‌ بودند، نه تنها تلف نشدند بلکه علائم بیماری را نیز نشان ندادند. به علاوه پاسخ ایمنی هومورال و سلولی نیز در آن ها نسبت به گروه‌های دریافت کننده سوش حاد به طور معنی داری بالاتر بود. در جمع بندی نهایی این مطالعه نشان داد که با استفاده از رده سلولی J774 که یک سلول دفاعی می‌باشد، می‌توان به طور معنی داری بیماری‌زایی سوش حادNc1 را کاهش داد؛ لذا این روش می‌تواند روش مناسبی برای تحقیقات آتی در راستای دستیابی به واکسن زنده تخفیف حدت یافته باشد.

کلیدواژه‌ها

عنوان مقاله [English]

Study on the attenuation of Neospora caninum after continuous passage on J774 cell line

نویسندگان [English]

  • P. Beigi 1
  • Mehdi Namavari 2
  • N. Razmi 1
1 Biochemistry Group, Islamic Azad University Branch Shiraz.
2 Vaccine and Serum Research Institute, Shiraz Branch, Agricultural Research, Education and Extension Organisation (AREEO), Tehran, Iran.
چکیده [English]

The aim of this study was to establish attenuated Neospora caninum (NC-1) tachyzoites through serial passage by J774 cell line. The virulence of attenuated tachyzoites for Balb/c mice was also evaluated. The NC-1 isolates were passaged 90 times in J774 cell line to produce a high-passage or attenuated strain. A total of 35 female BALB/c mice with an average age of six to eight weeks were randomly separated into seven groups. The first group as a control was inoculated subcutaneously with cell culture media and the second, third and fourth groups received low passage or acute NC-1 strain with different doses (5×106, 10×106, 20×106) of tachyzoites. The other three groups were inoculated with high-passage of NC-1 tachyzoites with similar doses. The mortality rate and pathological changes in all groups were noted daily. The cellular and humoral immunity were assessed by Skin test and ELISA, respectively. The results of the present study showed that the groups that received high-passage strain of Nc1 not only survived, but did not show pathological changes of neosporosis. In addition, cellular and humoral immune responses to NC-1 were significantly higher in mice that received high-passage tachyzoites of NC-1. These findings indicated that the serial passages of NC-1 in J774 cell line significantly led to decrease the virulence of NC-1. This attenuated tachyzoite could be used as a candidate for further research to develop live vaccines against Neospora caninum.

کلیدواژه‌ها [English]

  • Neospora caninum
  • J774
  • BALB/c

مراجع

1.Bartley, P.M., Wright, S., Sales, J.,Chianini, F.,Buxton, D., and Innes, E.A. 2006. Long Term passage of tachyzoites in tissue culture can attenuate virulence of Neospora caninum Invivo. Parasitology. 133:421-432.
2.Bartley, P.M., Wright, S.E., Maley, S.W., Buxton, D., Nath, M., and Innes, EA. 2009. The development of immune responses in Balb/c mice following inoculation with attenuated or virulent Neospora caninum tachyzoites. Parasite Immunology. 31: 392-401.
3.Chan, J., Xing, Y., Magliozzo, R.S., and Bloom, B.R. 1992. Killing of virulent Mycobacterium tuberculosis by reactive nitrogen intermediates produced byactivated murine macrophages. Journal of Experimental Medicine.175: 1111–1122.
4.Dijkstra, T., Barkema, HW., Eysker, M., Hesselink, JW and Wouda, W. 2002. Natural transmission routes of Neospora caninum between farm dogs and cattle. Veterinary Parasitology. 105:99-104.
5.Dubey, J.P. 2003. Review of Neospora caninum and Neosporosis in animal.The Korean Journal of Parasitology. 41(1): 1-16.
6. Dubey, J.P., Schares, G. 2006. Diagnosis of Bovine Neosporosis.Veterinary Parasitology. 140: 1-34.
7. Jiang, X., Leonard, B., Benson, R., Baldwin, C.L.1993. Macrophage control of Brucella abortus: role of reactive oxygen intermediates and nitric oxide. Cellular Immunology. 151: 309–319.
8.Jurado, E.R., Tudo, G., Borrell, S., Alcaide, F., Coll, P., Espanol, M., Casabona, N.M.,Mick, V., Montemayor, M., Moure, R., Salvado, M., Vicente, E., Gonzalez-Martın, J. 2011. Impaired fitness of Mycobacterium tuberculosis resistant isolates in acell culture model of murine macrophages. Antimicrobial Agents and Chemotherapy. 66, 2277–2280.
9.Khordadmehr, M., Namavari, M., Khodakaram-Tafti,A., Mansourian, M., Rahimian, A., Daneshbod, Y. 2013. Comparison of use of Vero cell line and suspension culture of murine macrophageto attenuation of virulence of Neospora caninum. Research in Veterinary Science.95 :515–521.
10.Lam, J., Herant, M., Dembo, M., Heinrich,V. 2009. Baseline mechanical characterization of J774 Macrophages. Biophysical Journal. 96: 248-254.
11. Lunden, A., Wright, S., Allen, J., Buxton, D. 2002. Immunisation of mice against Neosporosis. International Journal of Parasitology. 32:867-876.
12. Maria, M.B., Moreno-Altamirano, F., Sánchez-García, J., Legorreta-Herrera, M., Aguilar-Carmona, I. 2007. Susceptibility of mouse macrophage J774 to dengue virus infection. Intervirology. 50, 237–239.
13. Marugán-Hernández, V., Ortega-Mora, L.M., Aguado-Martínez, A., Alvarez-García, G. 2011. Genetic manipulation of Neospora caninumto express the bradyzoite-specific protein NcSAG4 in tachyzoites. Parasitology.138, 472-480.
14.Miller, C., Quinn, H., Ryce, C., Reichel, M., and Ellis, J. 2005.Reduction in transplacental transmission of Neospora caninum in outbred mice by vaccination. International Journal for Parasitology.35:821-828.
15. Monney,T., Hemphill, A. 2014. Vaccines against neosporosis: What can we learn from the past studies? Experimental Parasitology. 140:52-70.
16. Namavari, M., Mansourian, M., Khodakaram-Tafti, A., Hosseini, M.H., Rahimiyan, A., Khordadmehr, M., and Lotfi, M. 2011. Applicatio of chicken embryonated eggs as a new model for evaluating the virulence of Neospora caninum tachyzoites. Springer.21:1665-68.
17. Namazi, F., Oryan, A., Namavari, MM. 2010. Experimental infection of embryonated eggs of chicken with Besnoitia caprae. Trop Biomed. 27(3):417-23.
18. Naslund, P.K., Miller, W.C., Granger, D.L. 1995.Cryptococcus neoformans fails to induce nitric oxide synthase in primed murine macrophage-like cells. Infectionand Immunity. 63, 1298–1304.
19.Omata, Y., Kamiya, H., Kano, R., Kobayashi, Y., Maeda., R., Saito, A. 2006. Footpad Reaction induced by Neospora caninum tachyzoite extract in infected BALB/c mice. Veterinary Parasitology.139:102-108.
20. Ramamoorthy, S., Duncan, R., Lindsay, D.S. and Sriranganathan, N. 2007. Optimization of the use of C57BL/6 mice as a laboratory animal model for Neospora caninum vaccine studies. Veterinary Parasitology. 145: 253-259.
21. Setasimy, A., Namavari , M.2015.Use of chicken emberyonated eggs for evaluating the virulence of Toxoplasma gondii. Parasitology Disease. 11:1-3.
22. Sharief, A.H., Gasim-Khalil, E.A., Omer, S.A., Abdalla, H.S. 2008. Innovative serum free medium for in vitro cultivation of promastigote forms of Leishmania species. International Journal for Parasitology.57, 138–142.
23. Williams D. J. L., McGarry J., Guy F., Barber J. and Trees A. J. 1997. Novel ELISA for detection of Neospora-specific antibodies in cattle. Veterinary Record. 140: 328–331.
24. Wilkins, M.F.,O’Connell,E., TePunga, W.A. 1988. Toxoplasmosis in sheep III. Futher evaluation of the ability of a live Toxoplasma gondii vaccine to prevent lamb losses and reduce congenital infection flowing an experimental oral challenge. Newzealand Veterinary Journal. 36:86-89.
تحقیقات دامپزشکی و فرآورده‌های بیولوژیک
دوره 30، شماره 2
تیر 1396
صفحه 128-135

فایل ها

سابقه مقاله

  • تاریخ دریافت: 31 فروردین 1395
  • تاریخ بازنگری: 06 خرداد 1395
  • تاریخ پذیرش: 18 خرداد 1395

هم رسانی

ارجاع به این مقاله

آمار