بررسی آلودگی تیلریا آنولاتا در گاوهای کشتار شده با دو روش مقایسه‌ای واکنش زنجیره‌ای پلیمراز (PCR) و میکروسکوپی

عزیزی, حمیدرضا; عادل, میلاد; صالحی, فضل الله; صفیان, احمدرضا

doi:10.22092/vj.2014.100993

بررسی آلودگی تیلریا آنولاتا در گاوهای کشتار شده با دو روش مقایسه‌ای واکنش زنجیره‌ای پلیمراز (PCR) و میکروسکوپی

شناسنامه علمی شماره

نویسندگان

¹ استاد یار گروه پاتوبیولوژی،دانشکده دامپزشکی،دانشگاه شهرکرد

² فارغ التحصیل دکتری حرفه ای،دانشکده دامپزشکی،دانشگاه شهرکرد

³ فارغ التحصیل دکتری حرفه ای،دانشکده دامپزشکی ،دانشگاه شهرکرد

10.22092/vj.2014.100993

چکیده

به منظور مقایسه واکنش PCR در تشخیص گاوهای بومی حامل تیلریا آنولاتا نسبت به روش تهیه اسمیر (گسترش نازک خون محیطی) از اوایل اسفند ماه 1388 تا اواخر اردیبهشت ماه 1389 از 140 راس گاو بومی بالای یک سال ارجاع داده شده به کشتارگاه به صورت تصادفی نمونه گرفته شد.برای این منظور از ورید گوشی هر گاو، گسترش خونی تهیه و با الکل متانول فیکس شد تا برای رنگ آمیزی به روش گیمسا و جستجوی انگل با کمک عدسی 100 میکروسکوپ نوری و روغن امرسیون،مورد استفاده قرار گیرد. همچنین برای آزمایش PCR،از ورید وداج نیز 9 سی سی خون در لوله های اتوکلاو شده ای که حاوی 1 سی سی بافر سیترات 3.2درصد بود، جمع آوری و به آزمایشگاه بیوتکنولوژی دانشگاه شهرکرد منتقل گردید.از 140 نمونه مورد بررسی توسط روش PCR ،56 نمونه مثبت(40%) و 84 نمونه منفی (60%) بودند ولی در بررسی 140 نمونه اسمیر تهیه شده 12 مورد (8.57%) حاوی اشکال پیروپلاسمائی تیلریا آنولاتا و 128 نمونه (91.43%) عاری از اشکال پیروپلاسمائی انگل گزارش شدند. مقایسه بین دو روش PCR و تهیه اسمیر در تشخیص گاوهای حامل تیلریاآنولاتا ، حاکی از اختلاف معنی دار بین این دو روش می باشد(P<_0.005). با توجه به نتایج به دست امده در این بررسی ،حساسیت تکنیک PCR در تشخیص حاملین تیلریا آنولاتا نسبت به روش میکروسکوپی بسیار بالاست.با توجه به شیوع بالای آلودگی نیاز به مطالعات اپیدمیولوژی و اقدامات کنترلی را آشکار میکند.

20.1001.1.24235407.1393.27.2.10.5

عنوان مقاله [English]

Investigation of Theileria annulata infection in slaughtered of native cows by two methods of Polymerase Chain Reaction (PCR) and Microscopic examination

نویسندگان [English]

H.R Azizi ¹
M Aadel ²
F.A Salehi ²
A.R Safian ³

¹ Associate Professor of Veterinary Faculty of Shahrekord University

² Graduated of Veterinary Faculty of Shahrekord University

³ Graduated of Veterinary Faculty of Shahrekord University

چکیده [English]

In order to compare PCR technique with smear method to find out Theileria annulata in the cows carrier,cattle over one year was referred to the slaughter, samples were taken randomly since February 88 till May 89. We took blood from ear vein, then fixed with methanol & colored with gimsa at least we sarched for parasits under objective lenses (100x). Also for PCR,we took 9ml blood from jagular vein of each cows & added 1ml citrate buffer 3.2%, then sensed to biochemistry laboratory of Shahrekord University.From 140 samples by PCR technique:56 samples) 40%) were positive & 84 samples(60%) were negative. From 140 samples by smear method 12 samples (8.75%) were positive & 128 samples (91.43%) were negative. Comparison between PCR and detection of Asmer prepration method to detection of Theileria carrier cow, showed significant differences between two methods (P<0.005). According to the results obtained in this study, we understand that the sensitivity of PCR technique to diagnosis Theileria annulata carrier svery high compared to smears.Itis suggested that the epidemiological studies, and control measure be used.

مراجع

[ 1] Almeria, S., Gutierrez, J. F., Estrada, P. A., Ortuno, A., Ferrer, D. and Castella, J.

(2001). Bovine piroplasms in minorca (balearic islands, spain): A comparison of PCR-based and light microscopy detection, Vet, Parasitol, Vol , 20, No, 3 pp:249-259.

[2] D’oliveira, M., Vander, w. M., Miguel, A., Habela, M., Jacquiet, P. and Jongejan, F.(1995). Detection of Theileria annulata in blood samples of carrier Cattle by PCR, J, Clin, Microbiol, Vol , 33 No,10. pp: 2665-2669.

[3] Dumanli, N., Aktas, M., Cetinkaya, B., Cakmak, A., Koroglu, E., Saki, C. E., Erdogmus, Z., Nalbantoglu, S., Ongor, H., Simsek, S., Karahan, M. and Altay, K.( 2005). Prevalence and distribution of tropical theileriosis in eastern Turkey, Vet, Parasitol, Vol , 127 No,1. pp: 9-15.

[4] Hashemi, F. R. (1991). Chemotherapeutic value of paravaqoune and buparvaqoune against Theileria annulata infection of cattle, Res, Vet, Sci, Vol ,50. pp:204-207.

[5] Kirvar, E., Ilhan, T., Katzer, F., Hooshmand, R. P., Zweygarth, E., Gerstenberg, C., Phipps, P. and Brown, C. G. (2000). Detection of Theileria annulata in cattle and vector ticks by PCR, Parasitol, Vol , 120 No,3. pp:245-54.

[6] Martin, S. J.,Viseras, J., Adroher, F.J. and Garcia, F., P. (1999). Nested polymerase chain reaction for detection of Theileri annulata and comparison with conventional diagnostic techniques: its use in epidemiology studies, Parasitol, Res, Vol , 85, No,3. pp:243-245.

[7] Robinson, P. M.( 1982). Theileria annulata and it’s transmission: a review”, Trop, Anim, Health, Prod, Vol , 14. pp:3-12.

[8] Roy, K.C., Ray, D., Bansal, G.C. and Singh, R.K.( 2000). Detection of Theileria annulata carrier cattle by PCR, Indian, J, Exp, Biol, Vol , 38 No, 3). pp: 283-284.